Peptide Active Farmaceutski sastojci (API) stekli su značajnu pažnju u farmaceutskoj industriji zbog visokog specifičnosti, niske toksičnosti i potencijala za liječenje širokog raspona bolesti. Kao vodeći dobavljač peptida API-ja posvećeni smo pružanju visokokvalitetnih peptidnih proizvoda putem naprednih metoda sinteze. U ovom blogu ćemo se obvezati na različite načine na koji se peptidni API sintetizira.
Čvrsta - fazna sinteza peptida (SPPS)
Solidana - fazna peptidna sinteza jedna je od najčešće korištenih metoda za sintetiziranje peptidnog API-ja. Ovaj pristup bio je pioniran od Robert Bruce Merrifield 1963. godine, koji je revolucionirao sintezu peptida i zaradio mu Nobelovu nagradu u hemiji 1984. godine.
Osnovni princip SPPS-a uključuje pričvršćivanje C - terminus prve aminokiseline na nerastvornu solidnu podršku, poput smole. Ova smola pruža stabilnu platformu za naknadne hemijske reakcije. Amino skupina priložene aminokiseline zaštićena je odgovarajućom zaštitnom grupom, obično FMOC (9 - fluorenilmetiloksikarskihnil) ili BOC (TERT - butiloksikarbonyl).
Jednom kada je prva aminokiselina pričvršćena na smolu, uklanja se zaštitna grupa na svojoj amino grupi, izlaganje reaktivne amino grupe. Sljedeća aminokiselina, također sa zaštićenom aminovom grupom, tada se spojila na besplatnu amino grupu prethodno priložene aminokiseline pomoću spojnog reagensa. Često korišteni spojni reagensi uključuju DIC (N, N '- DiisopropilCarbodiimid), HBTU (O - Benzotriazole - N, N, N', N '- tetrametil - uronijum - heksafluoro - fosfat), i hatu (O - (7 - Azabenzotriazol - 1 - Yl) - N, N, N', N '- tetrametiluronijum heksafluorofosfat).
Nakon svakog koraka spajanja, nereagovane amino grupe su ograničene kako bi se spriječilo formiranje nizova brisanja. To se obično vrši pomoću sicEtic anhidrida. Ciklus deprotekcije, spajanja i zatvaranja ponavlja se za svaku aminokiselinu u željenom peptidnom sekvenci.
Jednom kada se cijeli peptidni slijed sastavi na smoli, peptid se cijeplje iz smole pomoću koktela za rascjep. Ovaj koktel uklanja i bilo koju stranu - granične grupe za zaštitu koje su bile prisutne na aminokiselinama tokom sinteze. Opreznute peptid se zatim pročišćava metodama poput visoke tečne hromatografije (HPLC).
Rješenje - fazna sinteza peptida
Rješenje - fazna peptidna sinteza je starija metoda, ali ipak ima svoje prednosti u određenim situacijama. U ovoj se metodi sve reakcije odvijaju u rješenju, a peptid nije priložen na čvrstu podršku.
Sinteza započinje zaštitom amino i karboksilnih grupa pojedinih aminokiselina. Slično SPPS-u, za zaštitu grupa poput FMOC-a ili BOC koriste se za Amino Group, a grupe ESTER koriste se za zaštitu karboksilne grupe.
Prvi korak je spajanje dvije zaštićene aminokiseline da formiraju dipeptid. To se postiže pomoću spojnog reagensa, slično onima koji se koriste u SPP-ovima. Nakon formiranja dipeptida, zaštitne grupe na jednom kraju dipetida uklanjaju se, a zatim se zajedno sa drugom zaštićenom aminokiserom ili dipetidom za čine dulji peptid.
Proces je ponovljen korak - po - korak dok se ne dobije željeni peptidni slijed. Jedan od izazova rješenja - fazna sinteza je pročišćavanje srednjih peptida na svakom koraku, jer reakcijska smjesa sadrži razne od - proizvode i nereagirani početni materijali. Pročišćavanje se obično vrši ekstrakcijom, kristalizacijom ili kromatografijom.
Kemijska ligacija
Hemijska ligacija je moćna metoda za sintezaciju velikih peptida ili proteina koji su teški za sastavljanje koristeći tradicionalne SPPS ili rješenje - sintezu faze. Jedna od najpoznatijih - poznatih metoda hemijskog užada je izvorna hemijska ligacija (NCL).
U NCL-u, peptid sa C - terminalnom tioesterom reagira s drugim peptidom sa N - stanicom terminala Cisteine. Reakcija se događa pod blagim vodenim uvjetima i rezultira formiranjem izvorne peptidne veze između dva peptida.
Proces uključuje prvo sintetiziranje dva ili više segmenata peptida koristeći SPPS ili rješenje - fazna sinteza. Jedan segment priprema se sa C - terminalnim tioesterom, a drugi sa N - terminalnim cisteinom. Ovi segmenti se zatim miješaju u odgovarajućem međuspremnici, a reakcija u listraju se odvija. Nakon ulaganja, ako je potrebno, ostatak cisteina može se dalje modificirati ili koristiti kao ručka za dodatne hemijske reakcije.
Sinteza konvergentne
Konvergentna sinteza je strategija koja kombinira prednosti oba SPPS i hemijsko ligaciju. Umjesto da sintetizira cijeli peptidni slijed na linearnoj modi, peptid je podijeljen u manje segmente, koji se sintetizira zasebno koristeći SPPS.
Ovi segmenti se zatim nalaze zajedno koristeći hemijske metode veženja. Ovaj pristup smanjuje broj koraka spojnih koraka potrebnih za sintezu velikih peptida, koji mogu poboljšati ukupni prinos i čistoću konačnog proizvoda. Na primjer, dugački peptid može se podijeliti u tri ili četiri segmenta, a svaki sadrži 10 - 20 aminokiselina. Ovi segmenti se sintetizira na smoli, cijepljenim, a zatim se navode na konvergentan način.
Primjeri našeg peptidnog APIS-a
Nudimo širok spektar peptidnih API-ja, uključujućiC20 - OTB - Glu (Obbu) - Atbi10 - ATBU) Fotografije - O Oie - Oana - OE,C20 (Otbu) - Glu (otbu), iPalmitoyl - Glu (OSU) - Otbu. Ovi peptidi se sintetizira pomoću gore opisanih naprednih metoda, osiguravajući visoku čistoću i kvalitetu.
Kontrola kvaliteta u sintezi peptida API
Kontrola kvaliteta je od najveće važnosti u sintezi peptidnog API-ja. Imamo sveobuhvatan sistem kontrole kvalitete koji će osigurati da naši proizvodi ispunjavaju najviše standarde.
Nakon sinteze, peptid se analizira raznim tehnikama, uključujući HPLC, masovnu spektrometriju (MS) i nuklearnu magnetnu rezonancu (NMR). HPLC se koristi za određivanje čistoće peptida, dok se MS koristi za potvrdu molekularne težine peptida. NMR može pružiti informacije o strukturi i konformaciji peptida.
Također vodimo studije stabilnosti kako bismo osigurali da peptidni API i ostane stabilan u različitim uvjetima skladištenja. To uključuje testiranje peptida na različitim temperaturama, pH vrijednostima i u prisustvu različitih pomoćnih sastojaka.
Zaključak
Sinteza peptidnog API-ja je složen i multi - korak koji zahtijeva napredne tehnike i strogu kontrolu kvalitete. Kao piptidni dobavljač APIS-a stalno istražujemo nove metode i tehnologije za poboljšanje efikasnosti i kvalitete naše sinteze. Bilo da se radi o solidno-faznoj peptidnom sintezi, rješenje - sinteza fazne, hemijsko ligaciju ili konvergentnu sintezu, zalažemo se za pružanje naših kupaca visokim - kvalitetnim peptidnim proizvodima.
Ako ste zainteresirani za kupovinu našeg peptidnog API-ja ili imate bilo kakvih pitanja o sintezi peptida, slobodno nas kontaktirajte za rasprave o nabavci. Radujemo se što ćemo sarađivati s vama kako bismo ispunili vaše potrebe za peptidnim API-u.
Reference
- Polja, GB, & Pleble, RL (1990). Čvrsta - fazna peptidna sinteza koristeći 9 - fluorenilmetoksikarbonyl aminokiseline. Međunarodni časopis za istraživanje peptida i proteina, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, Tw, Clark - Lewis, I., & Kent, SBH (1994). Sinteza proteina izvornom hemijskom ligacijom. Nauka, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC, & White, PD (2000). FMOC Solid Faza peptidna sinteza: praktični pristup. Oxford University Press.