-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Adresa
Soba 309, zgrada Meihua, industrijski park Tajvana, br. 2132 Songbai Road, Bao'an District, Shenzhen, Kina
-
E-pošte
FAQ
Koje metodologije sinteze Biorunstar koristi za sintezu peptida?
RE: Biorunstar je razvio različite metodologije sinteze faze rješenja kako bi zadovoljio zahtjeve kupaca. Obično se primjenjuje čvrsta faza Fmoc kemija.
Kako šaljete peptide? Koji QC podaci će biti dostavljeni?
RE: Svi peptidi će biti isporučeni DHL-om ili FedEx expressom kao u liofiliziranom prahu u pojedinačnim dobro označenim bočicama, na sobnoj temperaturi. Sa izuzetkom sirovih peptida, koji će biti provjereni samo MALDI-MASS spektrometrijom, svi sintetički pročišćeni peptidi dolaze sa projektnim izvještajem (CoA), MS podacima i HPLC podacima. biće obezbeđeni listovi sa podacima koji sadrže ključne karakteristike, kao što su sekvenca peptida, čistoća, količina, modifikacija, podaci masenog spektra i HPLC podaci.
Koje je tipično vrijeme zaokreta za sintezu peptida? Koliko je potrebno da mi se pošalje?
RE: Naše tipično vrijeme obrade je 2-3 sedmica za standardni peptid ispod 30 aminokiselina. Vreme preokreta varira u zavisnosti od dužine peptida, količine, rastvorljivosti i težine. Obično 3-5 dana da dođete do istraživača u drugim zemljama.
Koliko dugo možete sintetizirati?
RE: Biorunstar ima veliko iskustvo u sintezi dugih peptida, do 130aa. Za razliku od mnogih dobavljača peptida koji su zadovoljni samo u pravljenju peptida ispod 30 ili 40aa, Biorunstar ima dobro iskustvo u pravljenju peptida u rasponu od 40aa do 90aa. Teško je sintetizirati dugačke peptide, posebno 100aa ili duže. Ako planirate sintetizirati sekvencu od 130aa ili duže, kontaktirajte nas za prilagođenu ekspresiju proteina i uslugu pročišćavanja.
Šta ako se pojave neki problemi tokom procesa sinteze ili pročišćavanja?
RE: Svaki peptid ima svoje specifične karakteristike. Ukoliko se tokom sinteze dogode neki problemi izvan naših očekivanja, a ne možemo isporučiti vaš peptid na vrijeme, obavijestit ćemo vas u najkraćem mogućem roku. Igrom slučaja da nismo u mogućnosti da napravimo peptid, neće vam biti naplaćeni nikakvi troškovi.
TFA oblik soli, acetat ili HCl oblik soli: Koji oblik da odaberem?
Podrazumevano, peptidi se sintetiziraju u TFA soli. Za eksperimente vezane za kulturu ćelija ili tkiva, trebali biste razmotriti proizvodnju peptida u obliku acetata ili HCl soli na 98% ili više kako biste izbjegli abnormalne reakcije. Oblik acetata ili HCl soli može se zatražiti uz dodatnu cijenu.
Koliki je rok trajanja peptida?
RE: Peptidi su stabilni najmanje godinu dana ako se čuvaju liofilizirani u zamrzivaču. Ako se peptidi rastvore, rok trajanja se može smanjiti. Ako peptidi sadrže nekoliko reaktivnih aminokiselina koje se mogu oksidirati poput Trp, Met, ali posebno Cys, rok trajanja se također može smanjiti.
Peptid sadrži nekoliko cisteina i stoga može lako formirati disulfidne veze. Kako da izbjegnem ovo?
RE: Ako peptidna sekvenca sadrži nekoliko cisteina ili drugih reaktivnih aminokiselina, koje se lako oksidiraju, Biorunstar nudi isporuku peptida sa tragovima jakog reduktanta DTT. Peptid se isporučuje sa DTT samo ako je to izričito dozvoljeno od strane kupca.
Kako da pohranim svoje sintetičke peptide?
RE: Većina liofiliziranih peptida će biti stabilna na sobnoj temperaturi 2-3 sedmica. Za dugotrajno skladištenje, trebali biste skladištiti liofilizirane peptide na -20 stepenu. Treba izbjegavati ponovljene cikluse zamrzavanja-odmrzavanja. Ostavite da dođe do sobne temperature prije otvaranja. Rok trajanja rastvora peptida je ograničen; jednom pripremljenu otopinu peptida treba koristiti što je prije moguće.
Koja je čistoća sirovog i osoljenog peptida? Kako pročišćavate peptid? Šta su nečistoće?
RE: Za kratke peptide sa normalnim sekvencama ispod 15aa, generalno je 40-60% prema HPLC za sirovi kvalitet; 50-70% prema HPLC-u za osoljeni stupanj. Što je peptid duži, to je niža čistoća sirovog ili desoljenog. Peptidi se generalno prečišćavaju HPLC-om koristeći gradijent vode i acetonitrila. Većina nečistoća su fragmenti ili delecijski peptidi, peptidi sa nepotpunom deprotekcijom i zaostala sol i voda.
Objašnjenje čistoće peptida pomoću HPLC-a, ukupnog sadržaja peptida i ciljanog sadržaja peptida.
RE: Biorunstar isporučuje peptide prema bruto težini liofiliziranog praha. Liofilizirani prah uključuje nečistoće kao što su fragmenti ili delecijski peptidi, nepotpuno uklonjeni peptidi, TFA i zaostala voda. Čistoća peptida se meri pomoću HPLC. To je količina ispravnog peptida u odnosu na sve analite koji apsorbuju na ~214 nm (peptidna veza apsorbuje), najvjerovatnije delecija, skraćenje ili nepotpuno uklonjena zaštita, itd. Čistoća peptida prema HPLC-u ne uzima u obzir vodu i soli koji su obično prisutni u uzorku. Ukupni sadržaj peptida je postotak ukupnih prisutnih peptida u odnosu na sve prisutne u liofiliziranom peptidnom prahu. Ukupni sadržaj peptida se određuje analizom sadržaja dušika. Ciljani sadržaj peptida u liofiliziranom peptidnom prahu se stoga može zaključiti formulom: Ukupan sadržaj peptida X Čistoća peptida prema HPLC.
Koja je metoda označavanja fluoresceinom?
RE: FITC (Fluorescein izotiocijanat) je aktivirani prekursor koji se koristi za označavanje fluoresceinom. Za efikasno obeležavanje N-kraja, aminoheksanoil sa sedam atoma
odstojnik (NH{{0}CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) je umetnut između fluorofora (fluorosceina) i N-kraj peptida. Ovaj odstojnik pomaže da se odvoji fluorofor od njegove tačke vezivanja, potencijalno smanjujući interakciju fluorofora sa biomolekulom na koju je konjugiran i čineći ga dostupnijim za sekundarne reagense za detekciju.
odstojnik (NH{{0}CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) je umetnut između fluorofora (fluorosceina) i N-kraj peptida. Ovaj odstojnik pomaže da se odvoji fluorofor od njegove tačke vezivanja, potencijalno smanjujući interakciju fluorofora sa biomolekulom na koju je konjugiran i čineći ga dostupnijim za sekundarne reagense za detekciju.
Da li je moguće označavanje biotina (ili FITC) na C-terminalu?
RE: Da. Obilježavanje C-terminala biotina (ili FITC) se vrši dodavanjem ostatka lizina na C-terminusu peptida, a biotin (ili FITC) je vezan za bočni lanac lizina preko amidne veze. Pozitivni naboj lizina je uklonjen.
Koja je odgovarajuća dužina peptida za proizvodnju antitijela?
RE: Općenito, preporučuje se 10-25 ostatak peptida. Duži peptid može imati više epitopa, ali može imati i veće šanse za formiranje stabilnih sekundarnih struktura koje nisu prirodni oblici. Kraći peptid (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Šta je MAP?
RE: MAPS ili Multi-Antigenic Peptide je razgranati peptid na kojem su linearni peptidni lanci povezani na svom C-kraju preko polilizinske jezgre, čime se povećava veličina cijelog molekula. Ovo se radi kako bi se eliminisalo spajanje peptida na KLH. Čini se da je, međutim, konformacija peptida na MAP-u manje fleksibilna, a antitijela dobivena MAP-om tipično prepoznaju ciljni protein rjeđe nego konvencionalnom KLH konjugacijom. Osim toga, nema slobodnog peptida koji se proizvodi prilikom izrade MAPS-a, što otežava uklanjanje antitijela usmjerenih na polilizinsko jezgro. Prečišćavanje MAPS HPLC-om je teško, a MAPS se obezbeđuje bez verifikacije mase zbog njegove heterogenosti i velike molekularne veličine.
Zašto je moj rastvor peptida konjugovanog sa KLH zamućen?
RE: KLH ili Keyhole Limpet hemocijanin je veliki agregirajući protein (MW=4x105 – 1x107). Zbog svoje veličine i strukture, njegova rastvorljivost u vodi je ograničena, što uzrokuje zamućenje. Ovo neće uticati na imunogenost i zamućeni rastvor se može koristiti za imunizaciju.
Možete li objasniti M+Na i M+K masene vrhove u MALDI spektrima?
RE: Vrlo je uobičajeno vidjeti Na (natrijum) i K (kalijum) adukte u MALDI spektru. Natrijum i kalijum potiču iz vode koja se koristi u peptidnim rastvaračima. Čak i destilovana i dejonizovana voda ima tragove jona natrijuma i kalija, koji se nikada ne mogu u potpunosti ukloniti. Oni postaju jonizovani tokom MALDI masenog spektra i vezuju se za slobodne karboksilne grupe peptida. Budući da ne postoji sistem za prečišćavanje vode koji će ukloniti svaki pojedinačni jon natrijuma ili kalija iz vode, uočavanje adukta natrijuma i kalija s vremena na vrijeme je vrlo uobičajeno i neizbježno u MALDI masenim specifikacijama. Ovo nije pokazatelj da peptid nije čist, niti ga treba miješati s netačnom molekulskom težinom.