Hej, entuzijasti kolege ćelije! Kao dobavljač TET - 213 ćelije, imao sam svoj pravi udio iskustava koji se bave ovim jedinstvenim ćelijama. U ovom blogu podijelit ću neke savjete o održavanju održivosti TET - 213 ćelije.
Prvo, da shvatimo šta su TET - 213 ćelije. Oni su vrsta ćelijske linije koja je pokazala veliki potencijal u različitim istraživačkim područjima, poput neuroznanosti i studija raka. Ali držeći ih živim i udaranje nije uvijek šetnja parkom.
Medijum za kulturu
Osnova o održavanju bilo koje mobilne linije je pravi medij za kulturu. Za TET - 213 ćelije, visok - kvalitetan medij je obavezan. Obično preporučujem korištenje srednjeg bogat bištinskim hranjivim sastojcima. RPMI 1640 medij, dopunjen 10% nosivim govednim serumom (FBS), penicilinom i streptomicinom, radilo je za mene čuda. FBS pruža faktore rasta i hormone koji ove ćelije moraju da napreduju, dok antibiotici pomažu u sprečavanju kontaminacije.
Obavezno pravilno čuvajte srednje. Držite ga na 4 ° C i zaštitite ga od svjetlosti. Prije upotrebe, zagrijajte ga do 37 ° C u vodenoj kupelji. Ovo oponašaju tjelesnu temperaturu i udobnije je za ćelije.
Uslovi inkubacije
Tet - 213 ćelije su prilično izbirljive oko svog okruženja. Vole da se inkubiraju na 37 ° C u vlažnoj atmosferi sa 5% co₂. Ovo okruženje usko nalikuje fiziološkim uvjetima u ljudskom tijelu.
Uložite u dobar inkubator. Trebao bi imati stabilnu temperaturu i kontrolu Co₂. Redovno provjeravajte postavke inkubatora i kalibraciju kako biste osigurali da je sve u redu. Također, redovno očistite inkubator kako biste spriječili izgradnju - up zagađenja.
Subkulturiranje
Subkulturnost je važan korak u održavanju održivosti ćelija. Kad se TET - 213 ćelija dostignu oko 80 - 90% ušća, vrijeme je da ih podijelite. Prvo uklonite stari medij i oprati ćelije fosfatom - puferiranom fiziološkom otopinom (PBS) kako biste se riješili nečistoća. Zatim dodajte Trypsin - EDTA rješenje za odvajanje ćelija iz tikvice za kulturu. Inkubirajte tikvicu na 37 ° C nekoliko minuta dok ćelije ne počnu zaokružiti i odvojiti.
Jednom kada se stanice su odvojene, dodajte svježi medij za neutralizaciju tripsina. Centrifuga ćelijskog ovjesa pri malim brzinama za pelete ćelije. Resuspend peleta u svježi medij i prenesite ćelije na nove kulturne tikvice u odgovarajuću gustoću sjemena. Gustoća sjemena od oko 5 x 10⁴ ćelije / cm² obično dobro funkcionira za Tet - 213 ćelije.
Praćenje zdravlja ćelija
Redovno praćenje zdravlja vašeg Tet - 213 ćelije je presudno. Koristite fazu - kontrast mikroskop za provjeru morfologije ćelije. Healthy Tet - 213 ćelije trebale bi imati jednolični oblik i biti dobro - pričvršćen na tikvicu. Ako primijetite bilo koji znakovi ćelije smrti, poput plutajućih ćelija ili nenormalnih oblika ćelija, to bi mogao biti znak problema.
Također možete izvesti test održivosti, poput test Trypan Blue Izuzet. Pomiješajte malu količinu svog staničnog ovjesa sa tripanskom plavom. Žive ćelije će isključiti boju, dok će mrtve ćelije preuzeti i izgledaju plavo. Brojite broj živih i mrtvih ćelija pomoću hemocitometra za izračun postotka održivosti ćelije.
Kvaliteta reagenata
Koristeći visoke - kvalitetne reagense nisu dogovorni. Kvaliteta FBS, antibiotika i drugih aditiva može imati značajan utjecaj na održivost ćelije. Prilikom odabira FBS-a potražite seriju koja je testirana za njegovu sposobnost podrške rastu ćelija. Izbjegavajte korištenje istekle reagensa ili reagenata koji su nepravilno pohranjeni.
Neki drugi faktori koji treba uzeti u obzir su peptidi koji se mogu koristiti u kombinaciji sa TET - 213 ćelija. Na primjer,Melanocitetni proteinski PMel 17 (130 - 138) (ljudski)pokazao je potencijal u nekom istraživanju vezanom za signaliziranje ćelija.Urechistachininin IiDyrorphin a (1 - 17)su također peptidi koji se mogu istražiti u kontekstu TET - 213 ćelijskog istraživanja.
Rješavanje problema
Ako imate problema sa održavanjem održivosti vašeg Tet - 213 ćelija, ne paničarite. Evo nekih uobičajenih problema i rješenja:
Kontaminacija: Ako vidite znakove bakterijske ili gljivične kontaminacije, poput oblačnosti u srednjim ili vidljivim kolonijama, odmah odbacite kontaminirane kulture. Očistite inkubator i svu opremu temeljno. Obavezno slijedite stroge aseptičke tehnike prilikom rukovanja ćelijama.
Jadni rast ćelija: Ako ćelije ne rastu dobro, provjerite kulturu medij. Moglo bi biti da medij stari ili suplementi ne rade pravilno. Takođe, provjerite jesu li uvjeti inkubacije tačni. Ponekad neznatna promjena temperature ili co₂ koncentracije može utjecati na rast ćelija.
Ćelijski odred: Ako se ćelije previše odvajaju, to bi moglo biti zbog prekomjerne - tripsinizacije. Smanjite rok inkubacije tripsina sljedeći put. Takođe, pobrinite se da je Trypsin - Edta rješenje svježe.
Zaključno, održavanje održivosti TET - 213 ćelije zahtijeva pažnju na detalje i dobro razumijevanje njihovih potreba. Slijedeći ove savete možete zadržati svoj tet - 213 ćelije zdravo i produktivno.
Ako ste na tržištu za visokokvalitetni tet - 213 ćelije, volio bih razgovarati s vama. Bez obzira da li ste istraživač koji radi na malom - ljestvici ili veliku kompaniju za biotehnicu - mogu vam pružiti ćelije koje su vam potrebne. Dosegnite da započnete razgovor o vašim potrebama i kako možemo raditi zajedno.
Reference
- Freshney, RI (2016). Kultura životinjskih ćelija: priručnik osnovne tehnike i specijaliziranih aplikacija. Wiley.
- Doyle, A. i Griffiths, JB (2012). Kultura ćelije i tkiva: Laboratorijski postupci. Wiley - Blackwell.