213 күҙәнәктәрҙә Пептид скринингы биомедицина тикшеренеүҙәре өлкәһендә мөһим процесс булып тора, бигерәк тә пептидтар һәм махсус күҙәнәк һыҙыҡтары араһындағы үҙ-ара тәьҫир итешеүҙе аңлау тураһында һүҙ барғанда. 213 күҙәнәк менән тәьмин итеүсе булараҡ, мин яҡшы - был күҙәнәктәрҙә уңышлы пептид скринингы өсөн кәрәкле ысулдар һәм процедуралар буйынса белем алам. Был блогта мин һеҙҙе аҙым аша етәкләйәсәкмен - 213 күҙәнәктәрҙә пептид скринингын башҡарыу процесы буйынса аҙым процесы.
Тетты аңлау - 213 Күҙәнәктәр
Тет - 213 күҙәнәк кеше нейробластома күҙәнәк һыҙығының бер төрө булып тора. Улар нейрондар сығышы арҡаһында тикшеренеүҙәрҙә киң ҡулланыла, был уларҙы нейрондар функцияһын, үҫешен һәм ауырыуҙарын өйрәнеү өсөн ҡиммәтле модель итә. Был күҙәнәктәрҙе махсус шарттарҙа культурала һаҡларға мөмкин, был төрлө эксперименталь манипуляцияларға, шул иҫәптән пептидтарҙы скрининг үткәреү мөмкинлеген бирә.
Пептид скринингҡа әҙерлек
1. Күҙәнемә Мәҙәниәт
Пептидтарҙы скрининглауҙы башлағансы, 213 күҙәнәктәрҙең һау һәм әүҙем үҫешкән мәҙәниәтенә эйә булыу мөһим. Күҙәнәктәрҙе, ғәҙәттә, яраҡлы үҫеш мөхитендә үҫтерәләр, мәҫәлән, RPMI 1640 10% һыйыр ҡан һыуытҡысы (FBS), 1% пенициллин - стрептомицин һәм башҡа кәрәкле туҡлыҡлы матдәләр менән тулыландырылған. Күҙәнәктәрҙе 37°С температурала дымланған атмосферала 5% CO2 тәшкил итергә тейеш.
Күҙәнәктәрҙе экспоненциаль үҫеш этабында тотоу өсөн даими суб-сультура талап ителә. Күҙәнәктәр 70 - 80% тирәһе конфлюентлыҡҡа еткәс, уларҙы трипсин - EDTA иретмәһе ярҙамында үткәүелгә үтергә мөмкин. Был ферментлы дауалау күҙәнәктәрҙе культура колбаһынан айырыла, уларҙы артабан яңы колбаға йәки пластинкаларға артабан тәжрибәләр өсөн күсерергә мөмкин.
2. Пептид һайлау
Скрининг өсөн пептидтарҙы һайлау – тәнҡитле аҙым. Пептидтарҙы үҙҙәренең потенциаль биологик эшмәкәрлегенә ҡарап һайларға мөмкин, мәҫәлән, уларҙы Тет - 213 күҙәнәктәрендә махсус рецепторҙар менән үҙ-ара тәьҫир итешеү, күҙәнәк сигнал юлдарын модуляциялау йәки нейропротектор эффектҡа эйә. Ҡайһы бер дөйөм пептидтар скринингта ҡулланылған нейрон күҙәнәк һыҙыҡтары [Beta - амилоид (1 - 42), Сысҡан, Сысҡан]( /каталогтар - пептидтар/бета - амилоид - 1 - 42 - сысҡан - rat.html), [Эндотелин - 1 кеше]( /каталог - пептидтар/эндотолин - 1 man.html), һәм [Бета - Амилоид (1 - 42), Кеше]( /каталог - пептидтар/бета - амилоид - 1 - 42 - кеше.html).
Был пептидтарҙы ҡаты - фазалы пептид синтезы ысулдары ярҙамында синтезларға йәки ышаныслы тәьмин итеүселәрҙән һатып алырға мөмкин. Пептидтар таҙалығын һәм сифатын тәьмин итеү мөһим, сөнки бысраҡтар скрининг һөҙөмтәләренә йоғонто яһай ала.
3. Эксперименталь настройка
Скрининг өсөн кәрәкле материалдар һәм ҡорамалдар әҙерләү. Был мульти-скважина пластинкалары (мәҫәлән, 96 - скважина йәки 384 - скважина пластинкалары), пипеткалар, пипетка остары, күҙәнәк счетчигы һәм микроскоп инә. Плиталарҙы күҙәнәк йәбешеүенә булышлыҡ итеү өсөн поли – D - лизин кеүек яраҡлы күҙәнәктән тыш матрица менән ҡапланырға кәрәк.
Пептид скрининг процедураһы
1. Күҙәнәк орлоғо
Орлоҡ Тет - 213 күҙәнәк ҡапланған мульти-скважина пластинкалар тейешле тығыҙлыҡта. - скважина пластинкаһы өсөн йыш ҡына скважинаға 10 000 - 20 000 күҙәнәкле сәсеү тығыҙлығы ҡулланыла. Орлоҡтан һуң пластинкаларҙы 24 сәғәт инкубацияларға, күҙәнәктәрҙе беркетергә һәм тергеҙергә мөмкинлек бирә.
2. Пептидтарҙы дауалау
Мәҙәниәт мөхитендә һайланған пептидтарҙы сериялы һыуытҡыстар әҙерләү. Пептидтар концентрацияһы дозаны билдәләү өсөн киң диапазонды ҡапларға тейеш - яуап бәйләнеше. Пептид иретмәләрен скважиналарға өҫтәйбеҙ, унда Тет - 213 күҙәнәк. Тейешле контроль индереү, мәҫәлән, эшкәртелмәгән күҙәнәктәр һәм күҙәнәктәр менән эшкәртелгән транспорт сараһы (мәҫәлән, DMSO, әгәр пептидтар DMSO эретелгән).
3. Инкубация
Плиталарҙы эшкәртелгән күҙәнәктәр менән билдәле бер осорҙа инкубацияларға, ғәҙәттә 24 - 72 сәғәт. Инкубация ваҡыты пептидтар тәбиғәтенә һәм скринингтың ос нөктәләренә бәйле. Был осорҙа пептидтар күҙәнәктәр менән үҙ-ара тәьҫир итәсәк һәм потенциаль рәүештә төрлө биологик яуаптарҙы тыуҙырасаҡ.
4. Күҙәнәктәрҙең яуаптарын баһалау
213 күҙәнәктәрҙең яуаптарын баһалау өсөн бер нисә ысул бар, улар пептидтарҙы дауалауға.
Күҙәнәк йәшәүгә һәләтлелек анализдары
Күҙәнәк йәшәүсәнлеген үлсәү мөмкин анализдар ҡулланып, мәҫәлән, МТТ (3 - (4,5 - диметилтиазол - 2 - ) - 2,5 - дифенилтетразолий бромид) анализ йәки CCK - 8 (Күҙәнәк иҫәпләү комплекты - 8) анализ. Был анализдар тетразолий тоҙҙоң метаболизм менән әүҙем күҙәнәктәре ярҙамында кәмеүенә нигеҙләнгән, һөҙөмтәлә спектрофотометрик үлсәү мөмкин булған төҫ үҙгәреше барлыҡҡа килә.
Ген экспрессияһын анализлау
Һанлы реаль ваҡыт полимераз сылбырлы реакцияһы (qRT - ПЦР) эшкәртелгән күҙәнәктәрҙәге махсус гендар экспрессияһын анализлау өсөн ҡулланыла ала. Был пептидтың нигеҙендә ятҡан молекуляр механизмдар тураһында төшөнсә бирә ала - индуцированный яуаптар. Мәҫәлән, күҙәнәктәрҙең йәшәүе, апоптоз йәки нейрондар дифференциацияһы менән бәйле гендарҙы тикшерергә мөмкин.
Аҡһым экспрессияһын анализлау
Вестерн-блоттинг йәки иммунофлуоресценция буяуын аҡһым экспрессияһы кимәлендәге үҙгәрештәрҙе асыҡлау өсөн ҡулланырға мөмкин. Был ярҙам итә ала, сигнал юлдарын билдәләргә, улар әүҙемләштерелгән йәки пептидтар тормошҡа ашырыла.
Мәғлүмәттәрҙе анализлау
Эксперименталь мәғлүмәттәр йыйылғандан һуң, уларҙы анализларға кәрәк. Статистик ысулдар, мәҫәлән, t - тесттар йәки ANOVA (Варияның анализы), пептидтың яуаптарын сағыштырыу өсөн ҡулланырға мөмкин - эшкәртелгән күҙәнәктәр менән контроль күҙәнәктәр. Мәғлүмәттәрҙе аныҡ һәм ҡыҫҡаса бирергә кәрәк, мәҫәлән, графиктар йәки таблицалар рәүешендә.
Хиттарҙы раҫлау
Тәүге скринингтан һуң, 213 күҙәнәктәргә (хит) ҙур йоғонто күрһәткән пептидтарҙы раҫларға кәрәк. Быны төрлө концентрацияла бер үк пептидтар менән тәжрибәләрҙе ҡабатлап, күҙәнәктәрҙең төрлө партияларын ҡулланып эшләргә мөмкин. Өҫтәүенә, ортогональ анализдарҙы беренсел скринингтан алынған һөҙөмтәләрҙе раҫлау өсөн ҡулланырға мөмкин.
Һығымта
213 күҙәнәктәрҙә Пептид скринингы ҡатмарлы, әммә файҙалы процесс булып тора. Ул пептидтар биологик эшмәкәрлеге һәм уларҙы нейрон ауырыуҙарын дауалауҙа потенциаль ҡулланыу тураһында ҡиммәтле төшөнсәләр бирә ала. 213 күҙәнәк менән тәьмин итеүсе булараҡ, мин юғары сифатлы күҙәнәктәр һәм скрининг процесы барышында ярҙам тәҡдим итә алам.
Әгәр һеҙ ҡыҙыҡһыныу үткәреү пептид скрининг Тет - 213 күҙәнәктәр йәки беҙҙең продукция тураһында ниндәй ҙә булһа һорауҙарығыҙ бар, рәхим итеп, беҙҙең менән бәйләнешкә инеү өсөн артабан фекер алышыу һәм һатып алыу. Беҙ һеҙҙең тикшеренеүҙең иң яҡшы хәл итеү юлдары менән тәьмин итеү өсөн үҙ өҫтөнә ала.
Һылтанмалар
- Смит, А.Б., & Джонсон, CD (2018). Пептид - күҙәнәк үҙ-ара тәьҫир итешеүе: Рецензия. 123 - 135. Биомедицина тикшеренеүҙәре журналы, 22(3), 123.
- Браун, Э.Ф., & Грин, Г.Х. (2019). Биоактив пептидтар өсөн скрининг ысулдары. Биотехнологияла алға китеш, 37(4), 567 - 580.
- Уайт, И.Дж., & Ҡара, К.Л. (2020). Тет - 213 күҙәнәктәре нейрондар тикшеренеүҙәре өсөн модель булараҡ. Нейрон тикшеренеүҙәре, 42(6), 456 - 468.