Uobičajeni problemi i rješenja u procesu sinteze peptida uključuju sljedeće aspekte:
Sadržaj peptida: Sadržaj peptida odnosi se na postotak peptidnih supstanci u uzorku u odnosu na nepeptidne supstance. U peptidne proizvode, pored samog peptida, uključene su i komponente koje nisu soli koje se unose tokom procesa proizvodnje, kao što su voda, apsorbirani rastvarači, koordinacijski joni i soli.
Hemijska stabilnost:
Reakcija deamidacije: Asn/Gln ostaci se lako hidroliziraju i formiraju Asp/Glu.
Hidroliza: Peptidne veze u peptidima se lako razbijaju hidrolizom, posebno one nastale učešćem Asp, posebno Asp Pro i Asp Gly peptidne veze.
Reakcija racemizacije: Svi aminokiselinski ostaci osim Gly imaju kiralne alfa atome ugljika i skloni su reakciji racemizacije pod alkalnom katalizom. Ostaci aspi su najskloniji reakcijama racemizacije.
- degradacija eliminacije: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr i drugi ostaci mogu se razgraditi kroz - eliminaciju, što je vjerojatnije da će se dogoditi pri alkalnom pH i na koju utiču temperatura i joni metala
Fizička stabilnost:
Denaturacija, adsorpcija, agregacija ili precipitacija: Denaturacija peptida je obično povezana sa destrukcijom tercijarnih i sekundarnih struktura. U denaturiranom stanju, peptidi su skloniji hemijskim reakcijama i njihovu aktivnost je teško oporaviti. Intermedijer koji nastaje tokom procesa denaturacije ima nisku rastvorljivost i sklon je agregaciji i taloženju
očuvanje:
Najbolji uslovi skladištenja: Peptidi se uglavnom čuvaju u obliku liofiliziranog praha, koji je veoma stabilan na -20 stepeni, posebno nakon sušenja zamrzavanjem i čuva se u sušači od -20 stepeni. Većina peptida može se čuvati na ovoj temperaturi nekoliko godina bez promjene. Da bi se smanjio uticaj vlage, zamrzavanjem sušeni peptidi treba da se vrate na sobnu temperaturu u suvim uslovima pre nego što budu izloženi vazduhu.
Pakovanje: Hesheng Biotechnology preporučuje mala ambalaža kako bi se izbjegli ponovljeni ciklusi zamrzavanja-odmrzavanja, smanjio broj otvaranja i zatvaranja posuda, čime se smanjuju šanse za nepravilno rukovanje ili bakterijska kontaminacija i osigurava stabilnost peptida
Ispitivanje čistoće:
Garancija čistoće: Svi isporučeni peptidi su dostigli potrebnu čistoću, a peptidi koji ne zadovoljavaju standard će biti odbačeni. Rezultati HPLC i MS detekcije mogu potvrditi čistoću i molekularnu težinu peptida, dok prikazuju glavne nečistoće.
Druge metode detekcije, kao što su analiza aminokiselina ili elementarna analiza, mogu potvrditi sastav aminokiselina peptida kao dodatno sredstvo za potvrdu peptida
Tehnologija sinteze:
Sinteza peptida u čvrstoj fazi: Sinteza peptida u čvrstoj fazi ne zahtijeva prečišćavanje međuproizvoda, omogućavajući kontinuirane procese sinteze i postavljanje temelja za automatizaciju sinteze peptida. Na osnovu Fmoc hemijske sinteze, ciljni peptid je sintetizovan kovalentnim povezivanjem karboksilne grupe C-terminalne amino kiseline sa nerastvorljivom polimernom smolom, a zatim počevši od amino grupe aminokiseline
Gornji sadržaj sažima uobičajene probleme i kontramjere u sintezi peptida, pokrivajući više aspekata kao što su hemijska stabilnost, fizička stabilnost, uslovi skladištenja, ispitivanje čistoće, itd.